Javascript è attualmente disabilitato nel tuo browser.Diverse funzionalità di questo sito non funzioneranno mentre javascript è disabilitato.accesso aperto alla ricerca scientifica e medicaDalla presentazione alla prima decisione editoriale.Dall'accettazione editoriale alla pubblicazione.La suddetta percentuale di manoscritti è stata respinta negli ultimi 12 mesi.Riviste scientifiche e mediche peer-reviewed ad accesso libero.Dove Medical Press è membro dell'OAI.Ristampe in blocco per l'industria farmaceutica.Offriamo vantaggi reali ai nostri autori, inclusa l'elaborazione accelerata degli articoli.Registra i tuoi dettagli specifici e farmaci specifici di interesse e abbineremo le informazioni fornite agli articoli dal nostro ampio database e ti invieremo prontamente copie PDF via email.Torna a Diari » Progettazione, sviluppo e terapia di farmaci » Volume 15Valutazione dei niosomi punicalagini di origine bioattiva naturale nei processi di invecchiamento cutaneo accelerati da radiazioni ossidanti e ultravioletteAutori Mohamad EA, Aly AA, Khalaf AA, Ahmed MI, Kamel RM, Abdelnaby SM, Abdelzaher YH, Sedrak MG, Mousa SAPubblicato il 17 luglio 2021 Volume 2021:15 Pagine 3151—3162DOI https://doi.org/10.2147/DDDT.S316247Revisione tramite revisione tra pari anonima singolaEditore che ha approvato la pubblicazione: Dr Tuo DengEbtesam A Mohamad,1 Aya A Aly,2 Aya A Khalaf,2 Mona I Ahmed,2 Reham M Kamel,2 Sherouk M Abdelnaby,2 Yasmine H Abdelzaher,2 Marize G Sedrak,2 Shaker A Mousa3 1Dipartimento di Biofisica, Facoltà di Scienze, Università del Cairo, Giza, Egitto;2Programma di Biotecnologie/Chimica Biomolecolare, Facoltà di Scienze, Università del Cairo, Giza, Egitto;3The Pharmaceutical Research Institute, Albany College of Pharmacy and Health Sciences, Rensselaer, NY, USA Corrispondenza: Shaker A Mousa The Pharmaceutical Research Institute, Albany College of Pharmacy and Health Sciences, Rensselaer, NY, 12144, USA Tel +1-518-694 -7397 Fax +1-518-694-7567 Email [email protected] Introduzione: L'invecchiamento cutaneo è un processo normale che potrebbe essere accelerato o ritardato alterando l'equilibrio tra antiossidanti e radicali liberi a causa dell'aumento dell'esposizione alle specie reattive dell'ossigeno ( ROS) nelle cellule della pelle tramite i raggi UV.Gli antiossidanti possono neutralizzare gli effetti dannosi dei ROS e i metaboliti vegetali secondari potrebbero aiutare a proteggere dai raggi UV.Metodi: In questo studio, la punicalagina è stata estratta dal melograno e sono state determinate le concentrazioni di polifenolici e flavonoidi totali e sono state misurate le attività antiossidanti.La punicalagina è stata caricata sui niosomi e ne sono state studiate la morfologia e il rilascio.Uno studio in vitro è stato condotto su cellule HFB4 della linea cellulare di fibroblasti umani con invecchiamento indotto da H2O2 e radiazioni UV.È stato studiato l'arresto del ciclo cellulare e sono stati selezionati diversi geni (MMP3, Col1A1, Timp3 e TERT) coinvolti nel processo di invecchiamento della pelle per misurare l'effetto della punicalagina.Risultati: la punicalagina è riuscita a ridurre l'arresto della crescita delle cellule HFB4, ha attivato la produzione dei geni Col1A1 e Timp3, ha mantenuto il livello di collagene e ha abbassato l'MMP3.La punicalagina ha aumentato la concentrazione di TERT umano nelle cellule della pelle.Discussione: la punicalagina è promettente come antiossidante naturale per proteggere la pelle umana dall'invecchiamento.Parole chiave: invecchiamento cutaneo, punicalagine, niosomi, radiazioni UV, collageneDurante il ciclo di vita umano, la pelle è esposta a vari fattori dannosi.1 La nostra pelle è l'organo più grande, rappresenta un sesto del peso corporeo totale, e funge da barriera per proteggere il corpo dalla perdita d'acqua e da fattori ambientali come come sostanze chimiche, agenti patogeni e raggi ultravioletti (UV).2La pelle umana è divisa in tre strati: epidermide, derma e ipoderma.Nel derma si trovano collagene, fibre e fibre di elastina.L'invecchiamento della pelle mostra assottigliamento della pelle, perdita di elasticità, secchezza, rughe e guarigione ritardata delle ferite.In generale, con l'invecchiamento la pelle diventa pallida in apparenza.2L'invecchiamento intrinseco è definito come il processo di invecchiamento che si verifica naturalmente e inizia quando una persona ha circa vent'anni.Nella pelle, la produzione di collagene rallenta e l'elastina ha un po' meno di primavera.3 Al contrario, l'invecchiamento estrinseco è un fenomeno che può essere evitato in una certa misura.Molti fattori estrinseci o esterni spesso agiscono insieme al naturale processo di invecchiamento per invecchiare prematuramente la nostra pelle.I fattori estrinseci sono le frequenti espressioni facciali, la gravità, il sole e il fumo.Il fattore ambientale più dannoso che porta all'invecchiamento estrinseco è l'esposizione ripetuta ai raggi UV, denominata fotoinvecchiamento.3 I raggi UV A (UVA) (400–320 nm) rappresentano circa il 95–98% dei raggi UV totali che raggiungono il superficie della terra.Oltre a danneggiare l'epidermide, i raggi UVA penetrano in profondità nel derma per abbattere collagene ed elastina.2 L'esposizione a un'elevata quantità di radiazioni UV fa invecchiare prematuramente la pelle dei giovani a causa del verificarsi di mutazioni, a meno che le cellule cutanee danneggiate non vengano riparate.2–4 L'esposizione ai raggi UV porta alla generazione di ROS e al suo accumulo nelle cellule della pelle, con conseguente invecchiamento della pelle.È stato dimostrato che molti geni hanno un'influenza sul processo di invecchiamento.Il gruppo di geni noto come Collagens (COL) Gene group5 è responsabile della sintesi del collagene, oltre alle metalloproteinasi della matrice (MMP) che svolgono un ruolo importante nell'infiammazione, nell'invasione del tumore e nell'invecchiamento cutaneo.Le MMP degradano il collagene dermico e l'elastina durante il processo di invecchiamento.6,7 Precedenti ricerche hanno anche dimostrato l'importanza degli inibitori tissutali delle metalloproteinasi (TIMP), che svolgono un ruolo considerevole nell'inibizione della degradazione delle proteine ​​della matrice extracellulare.7La pelle come tessuto auto-rinnovante subisce una massiccia proliferazione durante la vita e l'accorciamento dei telomeri agisce per controllare la divisione mitotica e prevenire la proliferazione anormale come il cancro.E di conseguenza, si verifica l'invecchiamento cellulare.Il complesso enzimatico della telomerasi (Telomerase Reverse Transcriptase TERT) assicura il mantenimento della lunghezza dei telomeri nelle cellule germinali e tumorali.La telomerasi è attiva anche in alcune cellule somatiche come nell'epidermide ma è difficilmente rilevabile nel derma.L'accorciamento dei telomeri nelle cellule della pelle può essere accelerato a causa della proliferazione e degli agenti che danneggiano il DNA come specie reattive dell'ossigeno (ROS).8I processi di ossidazione nel metabolismo cellulare producono normalmente ROS per produrre l'energia necessaria ad alimentare altri processi biologici, e questo spiega l'inevitabile produzione di radicali liberi attraverso reazioni chimiche aerobiche delle cellule nell'invecchiamento cronologico che portano a danno mitocondriale, alterando la funzione cellulare e se il il danno è eccessivo, le cellule infette possono morire.1,2 Sebbene nelle cellule della pelle esista un forte sistema di difesa antiossidante, un'eccessiva produzione di ROS altera l'equilibrio tra radicali liberi e antiossidanti, un processo noto come stress ossidativo che può danneggiare le cellule perché i ROS influenzano costituenti cellulari come membrane, enzimi, proteine, lipidi, RNA e DNA oltre a ridurre i livelli di antiossidanti nella pelle, che porta a molte malattie e disturbi nonché all'invecchiamento.1,2,9È stato dimostrato che il perossido di idrogeno (H2O2) migliora lo sviluppo di lesioni cutanee e l'invecchiamento come altri radicali liberi perché aumenta l'espressione delle proteine ​​​​correlate all'infiammazione e riduce la formazione di collagene I/III e l'espressione delle proteine ​​antiossidanti.10 Studi precedenti hanno dimostrato che il trattamento dei fibroblasti cutanei umani con 0–500 µM di H2O2 ha ridotto la vitalità delle cellule in modo dipendente dalla concentrazione.Gli antiossidanti sono tutte le sostanze che possono eliminare direttamente i ROS o agire indirettamente per potenziare le difese antiossidanti o inibire la produzione di ROS.11–13 Sono prodotti per contrastare lo stress ossidativo generato dalla presenza di ROS in eccesso.14 Inoltre, gli antiossidanti si distinguono per la loro capacità intramolecolare legame idrogeno per ossidarsi ulteriormente per formare un radicale più stabile.11I metaboliti secondari delle piante possono essere usati come antiossidanti naturali per proteggere la pelle umana dal fotoinvecchiamento.11 Gli antiossidanti naturali dei metaboliti secondari vegetali possono proteggere la pelle umana dal fotoinvecchiamento.11 Contengono principalmente polifenoli (acidi fenolici, antociani, flavonoidi), carotenoidi e vitamine (vitamina E e C).15 Il melograno (Punica granatum L.) è un frutto che appartiene alla famiglia delle Punicaceae ed è costituito da diverse sostanze come fibre, vitamine, minerali, composti vegetali bioattivi e zucchero utili a ridurre il rischio di malattia.16,17I frutti del melograno sono divisi in origini anatomiche: buccia (buccia), arilli e semi, e ognuno ha composti preziosi.Importante è anche il succo, che può essere ottenuto dagli arilli o dalla frutta intera.La parte edibile così come i semi contengono composti biologicamente attivi come flavonoidi e fenolici, principalmente antociani in grado di sopprimere l'effetto dei ROS sull'organismo.18 La buccia pesa il 50% del peso totale del frutto ed è considerata un'importante fonte di composti bioattivi come flavonoidi, fenolici, composti altamente polimerizzati come lignine, melanine, tannini e composti proantocianidinici, polisaccaridi complessi e minerali.16 È stato dimostrato in studi precedenti che gli estratti di buccia sono più efficaci degli estratti di succo e semi come potenziale fonte di antiossidanti naturali.19,20 L'estratto di buccia ha una capacità antiossidante significativamente superiore rispetto ad altre piante antiossidanti naturali conosciute come il tè verde, e questo è il motivo principale per cui l'estratto di buccia è stato utilizzato in questo studio.Per migliorare le prestazioni terapeutiche dell'estratto di buccia, i niosomi possono essere utilizzati per proteggerli dall'ambiente biologico.I niosomi sono diventati popolari e pratici nel campo della somministrazione topica di farmaci a causa delle sue caratteristiche uniche.21–23 Il suo doppio strato è formato mescolando tensioattivi non ionici a combinazioni e rapporti molari variabili e può avere l'aggiunta di colesterolo.24–26 Il niosoma è sferico in forma ed è costituito da strutture lamellari microscopiche.I niosomi possono fornire agenti insolubili nelle membrane vescicolari a doppio strato e agenti idrofili nei compartimenti acquosi, nella regione bersaglio con dosi più basse del farmaco per ridurre gli effetti collaterali, aumentare la stabilità del farmaco, migliorare gli effetti terapeutici, prolungare il tempo di circolazione del sangue nel corpo e migliorare l'assorbimento dei farmaci nell'area bersaglio.La tossicità del farmaco è ridotta a causa del ridotto assorbimento del farmaco da parte dei tessuti aspecifici.22,27–32In questo studio, abbiamo estratto la punicalagina dalla buccia del melograno e poi l'abbiamo incapsulata nei niosomi per trattare la linea cellulare HFB4 come agente antietà.Abbiamo valutato gli effetti antiossidanti e anti-invecchiamento della punicalagina rivestita nei niosomi studiando l'arresto del ciclo cellulare e diversi geni dell'invecchiamento cutaneo (MMP3, Col1A1, Timp3 e TERT).I frutti del melograno sono stati acquistati da un mercato locale, Giza.Metanolo, etanolo e Tween 80 sono stati forniti da Sigma-Aldrich Co. (Schnelldorf, Germania).La linea cellulare HFB4 (cellule di fibroblasti umani) è stata fornita dal dipartimento di coltura tissutale, vaccini e sieri (VACSERA), Egitto, e il siero bovino fetale (FBS) è stato acquistato da Invitrogen Corp. (Carlsbad, CA, USA).Penicillina-streptomicina, tripsina, EDTA e tampone di Hank sono stati acquistati da Gibco, New York, NY, USA.Il dimetilsolfossido (DMSO) è stato ottenuto da Merck (Darmstadt, Germania).Il kit di citometria a flusso di ioduro di propidio per l'analisi del ciclo cellulare proveniva da Abcam, Il Cairo, Egitto.Il kit di estrazione dell'RNA Qiagen®, il kit MMX per PCR verde BioRad SYBR® e il kit ELISA TERT (umano) provenivano da BioVision, Inc., Milpitas CA, USA.Uno standard di riferimento punicalagin è stato ottenuto da Aktin Chemicals Inc., Chengdu, Cina.I frutti sono stati lavati e sbucciati, quindi le bucce sono state essiccate in un forno solare con temperatura compresa tra 27°C e 30°C (a seconda della temperatura climatica) per quasi 10 giorni.Le bucce essiccate sono state quindi raccolte e macinate in un miscelatore di macinazione fino ad ottenere la forma in polvere.Le bucce in polvere sono state macerate con il 20% di metanolo per 7 giorni in un luogo buio per evitare la degradazione per effetto della luce.Dopo che il processo di ammollo è stato completato, la miscela densa è stata strizzata a mano e filtrata attraverso un panno di mussola per ottenere un estratto acquoso di colore marrone scuro.L'estratto è stato quindi centrifugato e il surnatante conteneva l'estratto.33Un sistema HPLC è stato utilizzato per isolare la punicalagina ed era costituito da una pompa HPLC, un campionatore automatico raffreddato a 4°C (Thermo Finnigan, San Jose, CA, USA) e un rilevatore PDA (scansione da 200 a 700 nm).La colonna HPLC era C18, 5 µm, 4,6 × 250 mm (Thermo Finnigan).Per le condizioni cromatografiche è stato utilizzato il software ChemStation (Agilent Technologies, Inc., Santa Clara, CA, USA).La fase mobile era il solvente A (2% di acido acetico in acqua distillata) e il solvente B (0,5% di acido acetico in 50% di acetonitrile in acqua).La portata era di 1 ml/min.I campioni (50 µl) sono stati iniettati nella colonna HPLC (25°C).34 Le regioni di picco del cromatogramma sono state quantificate a 260 nm utilizzando una curva di calibrazione ottenuta con uno standard di riferimento punicalagin.I composti fenolici sono stati complessati con il reagente Folin-Ciocalteau e l'intensità del colore blu formato è stata misurata utilizzando acido gallico come standard.35 È stata calcolata la concentrazione di fenolici totali.L'assorbanza del colore blu risultante è stata letta a 765 nm utilizzando uno spettrofotometro UV-visibile (UVD-2960 LABOMED Inc., Los Angeles, CA, USA).Per ciascuna concentrazione sono state effettuate tre repliche ed è stata calcolata la media.I flavonoidi sono stati combinati con cloruro di alluminio ed è stata misurata l'intensità del colore prodotto.La concentrazione di flavonoidi è stata calcolata come quercetina equivalente (QE) con riferimento ad una curva di calibrazione standard prestabilita.Il contenuto è stato incubato per 30 minuti a temperatura ambiente e l'assorbanza è stata misurata a 415 nm.Il contenuto totale di flavonoidi negli estratti è stato calcolato come QE.La soluzione madre di estratto è stata diluita con metanolo a concentrazioni di 250, 125, 50, 25, 10 e 5 µg/mL.Un ml di DPPH 0,3 mM è stato aggiunto a 2,5 ml degli estratti o dello standard e la miscela è stata incubata a temperatura ambiente al buio per 30 minuti.L'assorbanza è stata misurata a 518 nm e convertita in percentuale di attività antiossidante (AA %).36,37Utilizzando un metodo di idratazione a film sottile, la miscela di 10 μL di Tween 80, 3 mg di colesterolo e punicalagina è stata sciolta in etanolo in un pallone rotondo.L'etanolo è stato evaporato utilizzando un evaporatore rotante a 50°C e una sottile miscela solida è apparsa sulla parete del pallone.38 Per formare niosomi multilamellari, quello strato è stato reidratato con 10 mL di soluzione salina tamponata con fosfato (PBS, pH 7,4) con bagno di sonicazione.39La capacità dei niosomi di intrappolare l'estratto di punicalagina è stata determinata mediante il metodo di centrifugazione.40 In breve, i campioni sono stati centrifugati a 12.000 rpm (VS-18000 M, Corea, potenza 220 V/50 Hz) per 30 minuti, per separare il farmaco libero (supernatante ) da quello incapsulato (pellet).Il surnatante limpido è stato quindi raccolto e agitato su vortice per ottenere una soluzione omogenea.L'assorbanza della punicalagina è stata misurata a diverse concentrazioni utilizzando uno spettrofotometro UV (JENWAY 6405, Regno Unito) a 255 nm (l'assorbimento di risonanza della punicalagina).La curva di calibrazione della punicalagina è stata realizzata tracciando l'assorbanza rispetto alla concentrazione.L'assorbanza della punicalagina libera nel surnatante è stata determinata a 255 nm;quindi, la sua concentrazione è stata calcolata dalla curva di calibrazione fatta per punicalagin e l'efficienza di incapsulamento per il noisome è stata calcolata dalla seguente equazione:La morfologia dei niosomi liberi e caricati con punicalagina è stata esaminata utilizzando un microscopio elettronico a trasmissione (TEM) (JEOL JEM.1230, Shizuoka, Giappone.)Due sacche per dialisi sono state lavate e immerse in acqua distillata.Ciascun campione (punicalagina libera e punicalagina intrappolata nei niosomi) è stato pipettato in una sacca e la sacca è stata sigillata.Quindi, le sacche sono state poste ciascuna in un becher da 250 ml contenente 200 ml di PBS con agitazione costante a 37°C.A diversi intervalli di tempo, il tampone è stato analizzato per il contenuto di punicalagina a 255 nm utilizzando uno spettrofotometro UV.Le linee cellulari HFB4 (fibroblasto dermico umano) sono state conservate come coltura di monostrato in Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM) contenente 10FBS, L-glutammato, piruvato di sodio e 1% di penicillina-streptomicina e quindi incubate a 37 ° C .Il mezzo DMEM è stato aggiunto alle cellule in una provetta da 15 mL e quindi centrifugato per eliminare qualsiasi mezzo di congelamento.Il pellet è stato risospeso in DMEM, quindi incubato a 37°C in un pallone T-75 per 2 giorni.Quando le cellule hanno raggiunto almeno l'80% di confluenza, sono state lavate due volte con PBS e sono state staccate, quindi le cellule HFB4 sono state raccolte e contate.La linea cellulare utilizzata è un fibroblasto dermico umano disponibile in commercio.41 I melanociti possono essere generati direttamente dai fibroblasti.42Il test MTT è stato utilizzato per valutare la vitalità cellulare.Il test dipende dalla riduzione dell'MTT.Le cellule (il conteggio delle cellule era 1 × 106) sono state sospese in 10 mL di DMEM + 10% FBS e seminate in piastre da 96 pozzetti a 8–10 × 103/pozzetto per 24 ore.Quindi, è stato applicato un trattamento con diluizione doppia su punicalagina e H2O2 per determinare la concentrazione per ciascuno.Le piastre sono state incubate per 24 ore a 37°C e quindi filtrate dal mezzo e ad ogni pozzetto sono stati aggiunti 10 μL di MTT.Dopo incubazione per 4 ore, i supernatanti sono stati rimossi e l'assorbanza è stata analizzata con un lettore ELISA (Exert 96, Asys Hitch, Ec, Neudorf, Austria) a 570 nm.La sottocoltura di cellule HFB4 è stata posta in 3 flaconi T-75 e in una piastra da 6 pozzetti, e tutte sono state incubate a 37°C fino a quando le cellule non hanno raggiunto almeno l'80% di confluenza.Le cellule sono state quindi distribuite in tre gruppi in flaconi T-75: cellule non trattate (CC), cellule trattate con concentrazione (0,11 mM) di H2O2 (H2O2/HFB4) e cellule trattate con punicalagina (0,27 mm) oltre a perossido di idrogeno (0,11 mM) (s + H2O2).Altri due gruppi di cellule sono stati posti in piastre da 6 pozzetti: cellule non trattate + esposizione ai raggi UV (cR) e cellule trattate con concentrazione (0,27 mm) di punicalagina + esposizione ai raggi UV (sR), quindi le due piastre da 6 pozzetti sono state esposto ai raggi UV (365 nm per 15 min ad un'altezza di 12,5 cm2).Dopo 24 ore di incubazione a 37°C, le cellule sono state prelevate dalle piastre da 6 pozzetti e poste in 5 provette (15 mL), quindi centrifugate per eliminare qualsiasi mezzo rimanente.Il pellet è stato risospeso e lavato due volte con PBS, quindi disperso in 0,25% di tripsina/EDTA nel tampone di Hank.Quindi, le linee cellulari HFB4 sono state raccolte in cinque provette per essere pronte per i test successivi.L'analisi del ciclo cellulare è stata eseguita utilizzando un kit di citometria a flusso di ioduro di propidio di Abcam®.Le cellule sono state preparate e conservate a 4°C fino al momento dell'uso, quindi sono state trasferite sul piano di lavoro per equilibrare a temperatura ambiente e quindi risospese per inversione delicata.Il pellet cellulare è stato risospeso in 200 μl di soluzione colorante di ioduro di propidio 1X + RNasi, quindi incubato per 20 minuti al buio a 37°C.La provetta è stata posta in ghiaccio (al buio) e le cellule risospese per inversione delicata.Quindi, i campioni sono stati analizzati mediante citometria a flusso.Per escludere detriti e aggregati cellulari, sono state impostate le porte FSC vs SSC e la fluorescenza dello ioduro di propidio è stata raccolta in FL2.La RT-PCR è stata eseguita per rilevare il cambiamento di piega nell'espressione dei geni MMP3, CoL1A1 e Timp3 con l'aiuto della beta actina come gene di pulizia.L'isolamento dell'mRNA è stato eseguito utilizzando il kit di estrazione RNeasy®.Le cellule sono state strappate e omogeneizzate in Buffer RLT.Quindi, etanolo è stato aggiunto alla miscela, creando condizioni che migliorano il legame selettivo dell'RNA alla membrana RNeasy.Il campione è stato quindi aggiunto alla colonna di spin RNeasy Mini.L'RNA totale è stato legato alla membrana, i contaminanti sono stati isolati in modo efficiente e l'RNA di alta qualità è stato filtrato in acqua priva di RNasi.Le fasi di legatura, lavaggio e risciacquo sono state eseguite mediante centrifugazione in una microcentrifuga.Quindi, è stata preparata la Master Mix e l'amplificazione è stata eseguita incubando la miscela di reazione nel dispositivo RT-PCR.I reagenti, i campioni e gli standard sono stati preparati dal kit ELISA TERT (umano) di BioVision.La piastra pulita è stata lavata 2 volte utilizzando una soluzione di lavaggio 1X, sono stati aggiunti 100 μL di ciascun campione e standard e i pozzetti sono stati coperti per 1,5 ore di incubazione a 37°C.Il contenuto della piastra è stato scartato senza lavare o lasciare asciugare completamente i pozzetti.Nei pozzetti è stata aggiunta la soluzione di lavoro dell'anticorpo per il rilevamento della biotina (0,1 mL), quindi la piastra è stata sigillata e lasciata per 60 minuti per l'incubazione.La soluzione è stata scartata e la piastra lavata 3 volte riempiendo i pozzetti con la soluzione tampone e messa a bagno per 1-2 minuti, decantata e applaudita con carta da filtro assorbente.La soluzione di lavoro SABC (0,1 mL) è stata aggiunta ai pozzetti e quindi la piastra è stata incubata a 37°C per 30 minuti, quindi la soluzione è stata scartata e lavata 5 volte.È stato aggiunto il substrato TMB (90 µL) e la piastra è stata incubata in un luogo buio per 15-30 minuti a 37°C.Alla fine sono stati aggiunti 50 μL di soluzione di stop e i risultati sono stati letti a 450 nm entro 20 minuti.I dati sono stati esaminati utilizzando SPSS v. 15.0.Variazioni significative tra i gruppi sono state stimate utilizzando l'analisi ANOVA unidirezionale.p ≤ 0,05 è stato considerato significativo.La punicalagina è stata isolata con HPLC confrontando l'estratto di metanolo di melograno con uno standard di riferimento di punicalagina (Figura 1A e B).Figura 1 Cromatogrammi HPLC.(A) Norma punicalagina.(B) Estratto totale di melograno.Ha principalmente α-punicalagin (1,04 min) e β-punicalagin (3,49 min).Figura 1 Cromatogrammi HPLC.(A) Norma punicalagina.(B) Estratto totale di melograno.Ha principalmente α-punicalagin (1,04 min) e β-punicalagin (3,49 min).Sono apparsi due picchi, che rappresentano α-punicalagin e β-punicalagin, ed entrambi sono stati isolati.È stata realizzata una curva di calibrazione e la concentrazione della punicalagina isolata è stata determinata come 7,34 mg/g (Figura 2).Figura 2 Curva di calibrazione per beta punicalagina.Figura 2 Curva di calibrazione per beta punicalagina.I polifenolici totali sono stati determinati utilizzando una curva standard tra diverse concentrazioni standard di acido gallico e l'assorbanza a 765 nm.I polifenolici totali erano 138 mg/g.I flavonoidi totali sono stati determinati utilizzando una curva standard tra diverse concentrazioni di quercetina.I flavonoidi totali erano 58 mg/g.Il valore di scavenging di DPPH era del 73,33% ed era strettamente correlato al contenuto totale di polifenoli.Si può presumere che questi composti abbiano una significativa capacità di ossidazione.Questo risultato è compatibile con gli studi precedenti43,44 in quanto il contenuto fenolico totale nella punicalagina riflette un'elevata attività antiossidante.I niosomi mostrano un'elevata efficienza per caricare l'estratto di punicalagina (92±3%).L'esame TEM ha mostrato la morfologia dei niosomi e la differenza di dimensioni tra quelli liberi (135–200 nm) e quelli carichi di punicalagina (185–335 nm) (Figura 3).Inoltre, ha mostrato che le dimensioni sono nella gamma nano.Figura 3 Immagini al microscopio elettronico a trasmissione (TEM) di (A) niosomi liberi, (B) niosomi che intrappolano la punicalagina.Figura 3 Immagini al microscopio elettronico a trasmissione (TEM) di (A) niosomi liberi, (B) niosomi che intrappolano la punicalagina.L'intrappolamento della punicalagina nei niosomi ha causato una diminuzione della velocità di rilascio della punicalagina dal sacco al mezzo (Figura 4).Figura 4 Il rilascio di punicalagina libera e niosomi carichi di punicalagina.Figura 4 Il rilascio di punicalagina libera e niosomi carichi di punicalagina.Il test di citotossicità ha mostrato le dosi sicure da utilizzare sulle cellule HFB4.Per H2O2 la concentrazione è stata determinata tra il fattore di diluizione 4096 e 8192, mentre la punicalagina era al fattore di diluizione 128 (Figura 5).Figura 5 Effetto di diverse concentrazioni di punicalagina e H2O2 sulla percentuale di vitalità cellulare.Figura 5 Effetto di diverse concentrazioni di punicalagina e H2O2 sulla percentuale di vitalità cellulare.La percentuale di cellule arrestate nella fase G2/M è aumentata nel caso di campioni cR e H2O2/HFB4;tuttavia, la percentuale di cellule arrestate nella fase G0/G1 è diminuita nel caso del campione H2O2/HFB4.I campioni (s + H2O2 e sR) che sono stati pretrattati con punicalagin hanno mostrato un effetto che si opponeva all'effetto risultante dall'H2O2 e dai raggi UV (Figura 6).Figura 6 La variazione della % di arresto per i cicli cellulari G0/G1, S, G2/M e Pre-G1.CC è la linea cellulare HFB4 di controllo, cR sono cellule esposte ai raggi UV (365 nm per 15 min ad un'altezza di 12,5 cm2), sR sono cellule trattate con punicalagina oltre all'esposizione ai raggi UV, H2O2/HFB4 sono cellule trattate con H2O2 e s + H2O2 è cellule trattate con punicalagina oltre a H2O2.Le barre di errore rappresentano la deviazione standard.Figura 6 La variazione della % di arresto per i cicli cellulari G0/G1, S, G2/M e Pre-G1.CC è la linea cellulare HFB4 di controllo, cR sono cellule esposte ai raggi UV (365 nm per 15 min ad un'altezza di 12,5 cm2), sR sono cellule trattate con punicalagina oltre all'esposizione ai raggi UV, H2O2/HFB4 sono cellule trattate con H2O2 e s + H2O2 è cellule trattate con punicalagina oltre a H2O2.Le barre di errore rappresentano la deviazione standard.L'espressione di MMP3 è aumentata nei campioni cR e H2O2/HFB4 e l'espressione di Col1A1 e Timp3 è diminuita in quei due campioni.I campioni s + H2O2 e sR hanno mostrato un effetto opposto a quello risultante da H2O2 e radiazioni UV (Figura 7).Figura 7 Piegare il cambiamento nell'espressione di diversi geni sui campioni.CC è la linea cellulare HFB4 di controllo, cR sono cellule esposte ai raggi UV (365 nm per 15 min ad un'altezza di 12,5 cm2), sR sono cellule trattate con punicalagina oltre all'esposizione ai raggi UV, H2O2/HFB4 sono cellule trattate con H2O2 e s + H2O2 è cellule trattate con punicalagina oltre a H2O2.Le barre di errore rappresentano la deviazione standard.Figura 7 Piegare il cambiamento nell'espressione di diversi geni sui campioni.CC è la linea cellulare HFB4 di controllo, cR sono cellule esposte ai raggi UV (365 nm per 15 min ad un'altezza di 12,5 cm2), sR sono cellule trattate con punicalagina oltre all'esposizione ai raggi UV, H2O2/HFB4 sono cellule trattate con H2O2 e s + H2O2 è cellule trattate con punicalagina oltre a H2O2.Le barre di errore rappresentano la deviazione standard.L'accorciamento dei telomeri si è verificato in modo significativo in entrambi i campioni di H2O2/HFB4 e cR rispettivamente del 64,20% e del 14,22%, mentre i campioni trattati con punicalagina hanno mostrato un accorciamento dei telomeri nei campioni sR e s + H2O2 rispettivamente solo del 31,19% e del 6,5% e le cellule erano protette da accorciamento dei telomeri mediato dallo stress ossidativo tramite esposizione H2O2 o UV (Figura 8).Figura 8 Misurazione quantitativa del TERT umano nei campioni.CC è la linea cellulare HFB4 di controllo, cR sono cellule esposte ai raggi UV (365 nm per 15 min ad un'altezza di 12,5 cm2), sR sono cellule trattate con punicalagina oltre all'esposizione ai raggi UV, H2O2/HFB4 sono cellule trattate con H2O2 e s + H2O2 sono le cellule trattate con punicalagina oltre a H2O2.Le barre di errore rappresentano la deviazione standard.Figura 8 Misurazione quantitativa del TERT umano nei campioni.CC è la linea cellulare HFB4 di controllo, cR sono cellule esposte ai raggi UV (365 nm per 15 min ad un'altezza di 12,5 cm2), sR sono cellule trattate con punicalagina oltre all'esposizione ai raggi UV, H2O2/HFB4 sono cellule trattate con H2O2 e s + H2O2 sono le cellule trattate con punicalagina oltre a H2O2.Le barre di errore rappresentano la deviazione standard.L'uso di composti bioattivi naturali e oli essenziali nell'invecchiamento cutaneo e nelle malattie della pelle è ben documentato nelle letterature.45,46 Inoltre, l'olio essenziale e i loro costituenti sono stati utilizzati come potenziatori della penetrazione della pelle per la somministrazione transdermica.47 Il nostro attuale rapporto ha esaminato l'effetto di punicalagina come potente antiossidante contro l'invecchiamento cutaneo.I polifenolici e i flavonoidi totali erano rispettivamente di 138 mg/g e 58 mg/g.Inoltre, la percentuale di attività di scavenging ha mostrato un'elevata attività (73,33%), dimostrando l'elevata attività antiossidante dell'estratto di buccia di melograno.18 Questi composti attivi agiscono per proteggere la pelle dall'assorbimento delle radiazioni UV, inibendo le reazioni dei radicali liberi indotte dai raggi UV o modificando l'antiossidante endogeno e sistemi infiammatori.11L'analisi TEM ha mostrato che l'ultra-struttura dei niosomi disposti e i niosomi carichi di punicalagina erano particelle di forma circolare non aggregate.La morfologia ha dimostrato l'omogeneità della molecola e i niosomi sono apparsi sferici.Le dimensioni variavano da 180 nm a 220 nm per i niosomi liberi, che sono più piccoli di quelli caricati con niosomi (218–437 nm).Ciò mostra che le dimensioni erano all'interno di un intervallo di dimensioni delle vescicole unilamellari ragionevolmente ampio.25 La carica elettrostatica tra le particelle cariche comparabili impedisce l'accumulo e quindi garantisce uno stato diffuso della nanosospensione nei test.I test di rilascio hanno mostrato una diminuzione dell'assorbimento di punicalagina perché i niosomi hanno trascinato leggermente il rilascio di punicalagina nel mezzo rispetto al suo stato libero.L'obiettivo di un rilascio prolungato di farmaci all'interno del corpo è stato raggiunto qui.Il test di citotossicità (MTT) è stato eseguito per garantire che fosse utilizzata una dose sicura e che la percentuale di vitalità cellulare fosse superiore al 90%.Il campione cR ha mostrato un numero maggiore di cellule in fase G2/M, mentre il campione sR ha mostrato un numero basso di cellule in fase G2/M.Per quanto riguarda il campione H2O2/HFB4 ha mostrato un maggior valore di cellule in fase G2/M e un basso numero di cellule in fase G0/G1, mentre il campione s + H2O2 ha mostrato un minor numero di cellule HFB4 in fase G2 /M e un numero elevato di celle in fase G0/G1.Ciò ha dimostrato la capacità di protezione della punicalagina sulle cellule rispetto agli effetti delle radiazioni UV e dell'H2O2.48Il test RT-PCR è stato effettuato per determinare il livello di espressione di 3 geni responsabili del processo di invecchiamento cutaneo e considerati marcatori dell'invecchiamento.Le MMP degradano il collagene nello strato dermico e le proteine ​​nella matrice extracellulare, quindi la sovraregolazione di MMP3 accompagnata dalla diminuzione di Col1A1 e Timp3 rispetto al controllo è stata mostrata nei campioni cR e H2O2/HFB4.Nei campioni s + H2O2 e sR, c'è stato un aumento sia di Col1A1 che di Timp3 e una diminuzione di MMP3 rispetto agli altri campioni.Nel test TERT è stato osservato che l'H2O2 e l'irradiazione UV hanno influenzato l'attività della telomerasi e promosso l'accorciamento della telomerasi, che porta alla senescenza cellulare e all'invecchiamento della pelle, ma i campioni pretrattati con punicalagina hanno mostrato un aumento della concentrazione di TERT umano.A causa della complessità dell'invecchiamento cutaneo, sono necessari studi futuri per utilizzare la pelle umana e il modello di pelle suina in vivo del danno e dell'invecchiamento della pelle mediati dai raggi UV per definire l'efficacia dei niosomi punicalagin nell'invecchiamento cutaneo.Ci sono molti fattori che aumentano il tasso di invecchiamento della pelle modificando l'equilibrio tra radicali liberi e antiossidanti nel corpo.La soluzione per contrastare i cambiamenti negativi è aumentare gli antiossidanti.Questo studio ha dimostrato l'alto effetto antiossidante della punicalagina estratta dal melograno e il suo caricamento nei niosomi come vettore.La punicalagina protegge le cellule HFB4 dall'arresto della crescita cellulare causato dai raggi UV e dall'H2O2, attiva la produzione dei geni Col1A1 e Timp3, mantiene il livello di collagene e riduce l'MMP3.La punicalagina aumenta la concentrazione umana di TERT.Concludiamo che il trattamento con punicalagina protegge efficacemente le cellule dall'invecchiamento causato dallo stress ossidativo.ROS, specie reattive dell'ossigeno;HFB4, linea cellulare di fibroblasti cutanei umani;UV, raggi ultravioletti;COL, collageni;MMP, metalloproteinasi di matrice;TIMP, metalloproteinasi;TERT, trascrittasi inversa della telomerasi;FBS, siero bovino fetale;DMSO, dimetilsolfossido;QE, equivalente di quercetina;DPPH, determinazione dell'attività antiossidante;AA%, percentuale di attività antiossidante;DMEM, il mezzo dell'aquila modificato di Dulbecco;CC, cellule non trattate;H2O2/HFB4, cellule trattate con concentrazione (0,11 mM) di H2O2;s + H2O2, cellule trattate con punicalagina (0,27 Mm) oltre a perossido di idrogeno (0,11 mM);cR, cellule non trattate + esposizione ai raggi UV;sR, cellule trattate con concentrazione (0,27Mm) di punicalagin+ esposte ai raggi UV.Lo studio è stato condotto secondo le linee guida internazionali.Gli autori dichiarano di non avere conflitti di interesse per questo lavoro.1. Zouboulis CC, Ganceviciene R, Liakou AI, Theodoridis A, Elewa R, Makrantonaki E. Aspetti estetici dell'invecchiamento cutaneo, prevenzione e trattamento locale.Dermatolo Clin.2019;37(4):365–372.doi:10.1016/j.clindermatol.2019.04.0022. Lefart ED.Invecchiamento cutaneo e stress ossidativo: gli effetti antietà di equol attraverso meccanismi biochimici e molecolari.Farm Biol.Ris. TossicoPLoS uno.Dermatolo Exp.J Am Acad Dermatol.Oxid Med Cell Longev.Int J Mol Sci.Compr Rev Food Sci Food SafeInt J Pharm.Int J Nanomedicina.J Agric Food Chem.Phytother ris.Nat Comune.Eliione.Clin Cosmet Investig Dermatol.J Pharmacol.Questo lavoro è pubblicato e concesso in licenza da Dove Medical Press Limited.I termini completi di questa licenza sono disponibili su https://www.dovepress.com/terms.php e incorporano la licenza Creative Commons Attribution - Non Commercial (unported, v3.0).Accedendo all'opera accetti i Termini.Gli usi non commerciali dell'opera sono consentiti senza ulteriore autorizzazione da parte di Dove Medical Press Limited, a condizione che l'opera sia adeguatamente attribuita.Per l'autorizzazione all'uso commerciale di quest'opera, consultare i paragrafi 4.2 e 5 dei nostri Termini.Contattaci • Informativa sulla privacy • Associazioni e partner • Testimonianze • Termini e condizioni • Segnala questo sito • TopContattaci • Informativa sulla privacy© Copyright 2022 • Dove Press Ltd • sviluppo software di maffey.com • Web Design di AdhesionLe opinioni espresse in tutti gli articoli qui pubblicati sono quelle degli autori specifici e non riflettono necessariamente le opinioni di Dove Medical Press Ltd o dei suoi dipendenti.Dove Medical Press fa parte di Taylor & Francis Group, la divisione Academic Publishing di Informa PLC Copyright 2017 Informa PLC.Tutti i diritti riservati.Questo sito è di proprietà e gestito da Informa PLC ("Informa") la cui sede legale è 5 Howick Place, London SW1P 1WG.Registrato in Inghilterra e Galles.Numero 3099067. Gruppo IVA nel Regno Unito: GB 365 4626 36Al fine di fornire ai visitatori del nostro sito Web e agli utenti registrati un servizio su misura per le loro preferenze individuali, utilizziamo i cookie per analizzare il traffico dei visitatori e personalizzare i contenuti.Puoi conoscere il nostro utilizzo dei cookie leggendo la nostra Informativa sulla privacy.Conserviamo anche i dati relativi ai nostri visitatori e utenti registrati per scopi interni e per condividere informazioni con i nostri partner commerciali.Puoi conoscere quali tuoi dati conserviamo, come vengono elaborati, con chi vengono condivisi e il tuo diritto alla cancellazione dei tuoi dati leggendo la nostra Informativa sulla privacy.Se accetti il ​​nostro utilizzo dei cookie e il contenuto della nostra Informativa sulla privacy, fai clic su "accetta".